细胞转染试剂
瞬时转染(transient transfection)是将目的核酸导入真核细胞的方式之一。在瞬时转染中,目的核酸导入感染性强的细胞系以获得目的核酸暂时但高水平的表达。转染的目的核酸不必整合到宿主染色体,能够在比稳定转染更短的时间内收获转染的细胞,并对溶解产物中目的基因的表达进行检测。
目前,市面上常见的用于细胞瞬时转染的产品主要有阳离子脂质体或阳离子聚合物类转染试剂,然而,该类产品对于原代细胞等难转染细胞的转染效果较差。除使用转染试剂以外,通过电穿孔实现细胞瞬时转染的电穿孔转染技术也较为常见,其转染原理是利用仪器使细胞受到电场刺激时,在细胞膜上形成瞬时孔,使得外源分子进入细胞完成转染,这种方法虽然可以实现对包括原代细胞等难转染细胞在内的大多数细胞的转染,但对细胞的伤害较大,且需要购置特殊设备,操作步骤繁琐、转染成本高。因此,亟需找到一种适用范围广,转染效果好,且无需购置特殊设备,操作步骤简单、转染成本低的实现细胞瞬时转染的方法。
本项目发现在特定化学处理和pH处理下,microRNA能够快速高效的进入细胞在此基础上进一步优化新型转染方法并对不同细胞系的适用性开展深入研究,开发了一种转染试剂。项目研发的转染试剂在细胞转染(尤其是细胞瞬时转染)中极具应用前景,具有以下优势:
• 能够有效将目的核酸转染至HEK 293T细胞、Hepa16细胞、肝原代细胞和C2C12细胞等不同类型的难转染细胞中,具有适用范围广的优势;
• 在宿主细胞中转染抑制靶基因的siRNA时,靶基因的表达在转染6 ~ 12小时便可观测到明显的降低,且靶基因抑制效果与利用Lipofectamine 2000转染的效果接近,具有转染起效时间快和转染效果好的优势;
• 在宿主细胞中转染目的核酸的整个转染过程无需使用特殊设备,操作步骤简单、转染成本低;
•具有较好的稳定性,有利于市场化应用;使用的组分均价格低廉,进一步降低了转染成本。
